食品检测方法概述

详细操作步骤:

1. 样品稀释:
   • 固体/半固体: 称取 25g 样品 + 225mL 稀释液 (磷酸盐缓冲液/生理盐水)，用均质器 (8000-10000 r/min) 均质 1-2 min 或拍击式均质器拍打 1-2 min，制成 1:10 稀释液。
   • 液体: 吸取 25mL 样品 + 225mL 稀释液，充分混匀 (可用带玻璃珠的锥形瓶或拍击式均质器)，制成 1:10 稀释液。
   • 用 1mL 无菌吸管吸取 1mL 的 1:10 稀释液，加入含 9mL 稀释液的试管中，振荡混匀，制成 1:100 稀释液。
   • 依次制备 10 倍系列稀释液，每次更换吸管。
2. 接种: 根据样品污染情况，选择 1-3 个适宜稀释度 (液体可选原液)，每个稀释度吸取 1mL 样品匀液加入 2 个无菌培养皿中。同时做空白对照 (1mL 稀释液)。
3. 倾注培养基: 及时向每个培养皿中倾注 15-20mL 已冷却至 46-50°C 的平板计数琼脂培养基 (PCA)，旋转培养皿使样品与培养基混合均匀。
4. 培养: 待琼脂凝固后，将平板倒置，放入 36°C±1°C 恒温培养箱培养 48h±2h。水产品需在 30°C±1°C 培养 72h±3h。(若有蔓延菌落风险，可在凝固后覆盖一层薄层琼脂)。
5. 菌落计数:
   • 选取菌落数在 30-300 CFU 之间、无蔓延菌落的平板进行计数。低于 30 CFU 记录具体数，高于 300 CFU 记为“多不可计 (TNTC)”。
   • 若有片状菌落，则该平板不宜采用；若片状不到一半且其余部分均匀，可计半皿乘以 2。
   • 链状生长按每条链计为一个菌落。
6. 结果计算与报告: 根据标准提供的公式 (考虑一个或两个稀释度在计数范围内、全高于或全低于计数范围等情况) 计算菌落总数。按规定进行数值修约，以 CFU/g 或 CFU/mL 为单位报告。空白对照不得有菌落生长。

详细操作步骤 (以第一法: 酶水解法为例):

1. 样品制备与预处理:
   • 取可食部分磨碎过 40 目筛，称取 2-5g 样品。
   • 置于滤纸漏斗中，用 50mL 石油醚或乙醚分次洗除脂肪。
   • 用 85% 乙醇溶液分次洗去可溶性糖，直至微糖检验 (α-萘酚法) 呈阴性。(对含麦芽糊精样品，先用 85% 乙醇洗，再用 40% 乙醇洗至阴性)。
   • 滤干乙醇，将残留物和滤纸用 50mL 水洗入烧杯。
2. 酶解:
   • 将烧杯置于沸水浴加热至糊化 (约 15 min)。
   • 冷却至 60°C 以下，加入 20mL α-淀粉酶溶液 (5g/L)。
   • 在 55-60°C 保温 1h，时时搅拌。
   • 取 1 滴加碘液检查，应不显蓝色 (若显蓝，需重新糊化、加酶、保温)。
3. 酸水解:
   • 将酶解液加热至沸，冷却后移入 250mL 容量瓶，用水定容、混匀、过滤 (弃初滤液)。
   • 准确吸取 50.00mL 滤液至 250mL 锥形瓶，加 5mL 盐酸 (1+1)。
   • 装上回流冷凝器，在沸水浴中回流 1h。
4. 中和与定容:
   • 冷却后加 2 滴甲基红指示液，用 NaOH 溶液 (200g/L) 中和至黄色刚出现。
   • 溶液转入 100mL 容量瓶，洗涤锥形瓶并入容量瓶，用水定容至刻度，混匀备用。
5. 滴定测定 (费林法):
   • 标定碱性酒石酸铜溶液: 用已知浓度的葡萄糖标准溶液滴定一定体积的碱性酒石酸铜甲、乙混合液，记录消耗体积 V₀，计算其相当于葡萄糖的质量 m₁。
   • 试样预测: 用待测样液滴定相同体积的碱性酒石酸铜混合液至终点，估算消耗体积。
   • 试样测定: 精确滴定，记录平均消耗体积 V₁。
   • (若浓度过低，可反滴定)。
6. 计算与报告: 根据 m₁ 和 V₁ (或反滴定结果)，计算出样品中葡萄糖的质量 X₁ (或 X₂)，减去试剂空白值 X₀，再乘以换算系数 0.9，除以样品取样量，得到淀粉含量 (%)。

注：第二法 (酸水解法) 和第三法 (皂化-酸水解法) 在预处理和水解步骤上有所不同，但最终都是测定水解产生的葡萄糖含量。详情请查阅标准原文。